GB/T 24800.6-2009

化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法

引言

本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》贵的的禁用物质，部分作为化妆品生产原料即添加组分添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂志带入化妆品时，测化妆品成品应符合《化妆品卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。

目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的定义，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。

化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法

1 范围

    本标准规定了化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法。

本标准适用于化妆品中二十一种磺胺的测定。

2 规范性医用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用贰成为本标准的条款。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法

3 原理

试样经溶剂提取，离心过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。

4 试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均分析纯，水为GB/T 6682贵的的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 四氢呋喃：色谱纯。

4.3 氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：准确称取4g氢氧化钠于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。

4.4 甲酸溶液（0.1%）：准确量取1ml甲酸于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后备用。

4.5 甲醇水溶液：准确量取50ml甲醇和50ml水，混匀后备用。

4.6 磺胺胍、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基吡啶、磺胺二甲噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲嘧啶、磺胺唑噁啉、磺胺硝苯、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、琥珀酰磺胺噻唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺领苯二甲氧嘧啶、磺胺二甲异噁唑标准品：纯度大于97%。

4.7 二十一中磺胺标准储备液：准确称取每种磺胺标准物质（4.6）各100mg，分别置于100ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）溶解并定容至刻度，摇匀，配置成浓度分别为1000ug/mL的标准储备液，于4℃避光保存，可使用三个月

注磺胺噁唑标准储备液配置时，可加入数滴氢氧化钠溶液（4.3）辅助溶解。

4.8 二十一种磺胺的混合标准储备液：分别准确移取二十一种磺胺标准储备液歌4ml余100ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）定容至刻度，该溶液中二十一中磺胺的浓度均为40ug/mL。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱仪（LC-10A液相色谱仪）：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2 液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）仪：配有电喷雾离子源（ESI）.

5.3 分析天平：感量为0.0001g和0.001g。

5.4 离心机：转速不低于5000r/min。

5.5 超声波水浴。

5.6 具塞比色管：10ml。

5.7 具塞塑料离心管：10ml。

5.8 微孔滤膜：0.45um，有机相。

6 分析步骤

6.1 样品处理

6.1.1 膏霜、乳业、水剂、散粉、香波类样品

称取1g（精确至0.001g）试样于10Ml具塞比色管中，加入5ml甲醇，再加水至10ml，超声提取20min。取部分溶液转移至10Ml具塞比色管中，以不低于5000r/min离心15min，上清液经0.45um微孔滤膜过滤，过滤液作为待测样液。

注：如离心难以得上清液可加适量氯化钠破乳。

6.1.2 唇膏类样品

称取1g（精确至0.001g）试样于10Ml具塞比色管中，加入2ml四氢呋喃，超声提取10Min，再加水至10Ml，超声提取10min。取部分溶液转移至10Ml具塞比色管中，以不低于5000r/min离心15min，上清液经0.45um微孔滤膜过滤，过滤液作为待测样液。

6.2 测定条件

高效液相色谱测定条件如下：

A，色谱柱：Copsil XB-C18，5um,250mm×4.6mm（内径）。

B， 流动相见表1.

C， 流速：1.0ml/min。

D，柱温：32℃。

E， 波长：268nm。

F， 进样量：20ul。

表1流动相

6.3 标准曲线的绘制

用甲醇水溶液（4.5）将二十一种磺胺混合标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.1ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml的混合标准工作液，按6.2的测定条件浓度由低到高进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。

二十一种磺胺标准品色谱图见A.1

6.4 测定

按6.2的测定条件对待测样液进行测定，用外标法定量。待测样液中磺胺的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围测应稀释后再进样分析。必要时，阳性样品需要用液相色谱-质谱确认试验（参见附录B）

6.5 空白试验

除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

7结果计算

结果按式（1）计算，计算结果保留2为小数（计算结果应扣除空白值）：

Wi=1000×Ci×V/m…..(1)

Wi—试样中被测磺胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）

Ci—从标准工作曲线上查出的样液中被测磺胺的浓度，单位为ug/ml

V—样液最终定容体积，单位L

m—试样的质量，单位g

8 检出限和定量限

本标准的检出限和定量：磺胺胍、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基吡啶、磺胺二甲噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲嘧啶、磺胺唑噁啉、磺胺硝苯的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.6mg/kg；磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、琥珀酰磺胺噻唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺领苯二甲氧嘧啶、磺胺二甲异噁唑的检出限为0.4mg/kg，定量限为1.2mg/kg。

9 回收率

在天津浓度为0.2mg/kg-40mg/kg浓度范围内，回收率在85%-110%之间，相对标准偏差小于10%。

10 允许差

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。

附录B，详细请电话咨询：0571-61100054    www.htcee.com

关键词：二十一种磺胺，高效液相色谱法，化妆品新规，GBT 24800.6-2009